1) 组织总蛋白的提取

a. 以1mL预冷的裂解液中加入10μL的磷酸酶抑制剂A管和10μL的磷酸酶抑制剂B管、10μL蛋白酶抑制剂的比例混匀，放置在冰上备用；

b. 称取0.1g组织，剪碎，然后加入0.5-1mL的裂解液（可同比放大用量），匀浆或研磨直至没有明显的组织块，这个过程于冰上操作；

c. 将组织匀浆液移入1.5mL的EP管中，4℃，10000-14000g离心3-5min；吸取上清至新的管中；

d. 进行蛋白定量等后续实验或者保存于-80℃冰箱，即用即取，避免反复冻融，避免长时间储存。

2）细胞总蛋白的提取

以1mL预冷的裂解液中加入10μL的磷酸酶抑制剂A管和10μL的磷酸酶抑制剂B管、10μL蛋白酶抑制剂的比例混匀，放置在冰上备用；裂解混合液的用量：10^7个细胞需要裂解液1mL；

a. 贴壁细胞

弃去培养基，用预冷的PBS轻柔地清洗细胞表面两遍，弃去PBS，然后按细胞数加入裂解混合液，于细胞瓶、培养板或培养皿中，用移液管吹散贴壁的细胞，对于贴壁紧的细胞也可使用细胞刮刀，再移入EP管中，冰上放置2-10min，期间剧烈震荡 3-4次，每次30秒。充分裂解后，4℃，10000-14000g离心3-5min；将上清移入新的EP管中；进行蛋白定量或者后续蛋白实验。

b. 悬浮细胞

4℃，500 g离心5 min，去上清，沉淀用预冷的PBS洗涤两遍，按细胞数加入裂解混合液，冰上放置2-10min，期间剧烈震荡 3-4次，每次30秒。充分裂解后，4℃，10000-14000g离心3-5min；将上清移入新的EP管中；进行蛋白定量或者后续蛋白实验。

（提取的蛋白建议保存于-80℃，即用即取，避免反复冻融，避免长时间储存。)

注：裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，如NF-κB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。